諾坦普 (NanoTemper)
新一代 Monolith 系列分子互作分析儀
MO 系列分子互作儀,采用創(chuàng)新性的光譜位移技術(shù) (Spectral Shift) 和 經(jīng)典的微量熱泳動技術(shù) (MicroScale Thermophoresis, MST),輕松檢測具有挑戰(zhàn)性的分子互作。僅需極微量的樣品 , 即可在液體環(huán)境中快速、精確地定量檢測各種類型的分子間相互作用力,且檢測濃度范圍廣、操作簡單。
1. 技術(shù)優(yōu)勢
功能全面,靈活應(yīng)對不同類型的親和力檢測項目
(1)實現(xiàn)幾乎所有類型分子間的親和力檢測:從IDPs、膜蛋白、大型蛋白復(fù)合體到PROTACs、小分子甚至離子,檢測各種類型的分子間結(jié)合。
(2)不依賴于分子量和粒徑變化檢測:結(jié)合檢測不受由配體結(jié)合引起的粒徑和分子量變化限制。
(3)樣品消耗量極低:為 ITC 實驗準(zhǔn)備大量的、高濃度的互作樣品是非常困難的。Monolith 系列僅需幾微升的樣品濃度即可,為您節(jié)約寶貴的樣品。
(4)液體環(huán)境檢測,更接近天然條件:在液體環(huán)境中直接檢測,且適用于幾乎所有的緩沖液,保證樣品在天然條件下自由發(fā)生相互作用,獲得更可靠的結(jié)果。
(5)不僅限于取得Kd值數(shù)據(jù):研究人員還可計算結(jié)合的化學(xué)計量比*和熱力學(xué)參數(shù)*,并通過競爭結(jié)合實驗進行相對親和力
和協(xié)同性評估*。
* 需進行線下數(shù)據(jù)處理及分析,無法在MO系列儀器配套軟件中完成。
(6)不局限于兩種分子間的互作分析:競爭結(jié)合實驗、多種分子結(jié)合檢測都可以輕松搞定。
高品質(zhì)的毛細(xì)管則保證了高品質(zhì)的數(shù)據(jù),使用毛細(xì)管的優(yōu)勢眾多:僅需微量樣品,在溶液中檢測,
接近天然環(huán)境,無需固定樣品,甚至無需進行蛋白純化。
2. 技術(shù)原理
Monolith 可搭載光譜位移和 MST 兩種生物物理檢測方法,用于結(jié)合親和力的檢測。
在實驗中,我們對其中一個分子進行熒光標(biāo)記*,然后將其與一系列梯度稀釋的結(jié)合分子等量混勻,接下來使用毛細(xì)管吸取樣品并放入儀器開始檢測。
*此外,色氨酸內(nèi)源熒光也可用于免標(biāo)記 MST 檢測。
(1)光譜位移技術(shù)(Spectral Shift )
光譜位移技術(shù)通過熒光發(fā)射光譜的藍(lán)移或紅移來檢測分子間的結(jié)合。Monolith X 在等溫條件下精確檢測
650nm 和 670nm 雙波長的發(fā)射光,因而能夠精確檢測到極細(xì)微的光譜位移。接下來,以配體濃度為橫坐標(biāo),雙波長熒光強度的比值為縱坐標(biāo)作圖,擬合得到平衡解離常數(shù) Kd。

(2)微量熱泳動技術(shù)(MicroScale Thermophoresis)
微量熱泳動(MicroScale Thermophoresis,MST) 是一種定量分析生物分子間相互作用的前沿技術(shù)。通過精確檢測熒光變化,結(jié)合靈敏的熱泳動現(xiàn)象,MST 提供了一種靈活、強大和快速測量分子間相互作用的
方法。MST 技術(shù)是通過激光在溶液中產(chǎn)生精確而短暫的溫度變化從而檢測配體結(jié)合引起的熒光強度變化。以配體濃度為橫坐標(biāo),熒光值為縱坐標(biāo)作圖,從而獲得平衡解離常數(shù) Kd。

MO 系列儀器測量一個 Kd 值僅需 10 分鐘,專家模式下最快僅需 90 秒,而無需額外冗長的數(shù)據(jù)分析。通過檢測與配體結(jié)合后,熒光標(biāo)記的蛋白或者具有自發(fā)熒光的樣品的熒光強度在溫度梯度中隨時間而變化 (上左圖中灰色部分),然后將選定時間段內(nèi)的熒光強度對應(yīng)配體濃度進行擬合作圖,軟件自動計算得到該結(jié)合的親和常數(shù) Kd 值 (上右圖)。
3. 儀器軟件
智能軟件自動進行數(shù)據(jù)分析,使您對實驗結(jié)果更加自信。
對于大多數(shù)的軟件,當(dāng)您加載樣品之后才會啟動。但是 MO 軟件別具一格——它不但可以在實驗啟動之前
為您提供每一步驟的詳細(xì)指導(dǎo),助您快速設(shè)置實驗;而且實驗結(jié)束時,會立即根據(jù)所得數(shù)據(jù)提供實驗優(yōu)化
建議,全程為您提供可靠信息。MO. Control 2 軟件增加而了緩沖液條件優(yōu)化功能,提高效率,幫助您快速獲得結(jié)果。
4. 應(yīng)用范圍
Monolith 系列分子互作儀可以檢測幾乎所有類型的分子互作,包括蛋白,小分子,多肽,核酸,
脂類等,應(yīng)用范圍非常廣泛。
(1)蛋白——小分子
? 自噬—溶酶體靶向降解
? 基于結(jié)構(gòu)的藥物設(shè)計
? “靶向降解組學(xué)”鑒定中藥成分靶點
? 中藥小分子抑制劑作用機制
? 靶向雄激素受體液 - 液相分離的藥物開發(fā)
? 新型泛素化反應(yīng)的分子機制
(2)蛋白——離子
? 植物硝態(tài)氮新受體
? 植物免疫抑制與廣譜抗病機理
? 銅元素調(diào)節(jié)水稻廣譜抗病毒的機制
? 低溫特異鈣信號的感知和應(yīng)答機制
(3)蛋白——多肽
? 植物防止多精受精的分子機制
? 小肽—受體激酶調(diào)控花粉與柱頭識別的分子機理
? 植物重要肽激素作用機理
? 多肽 PROTAC 降解致癌蛋白
(4)蛋白——蛋白
? 淬滅抑制蛋白 SOQ1 調(diào)節(jié) qH 的作用機制
? 胃癌基因治療新靶點 CPEB3 作用機制研究
? 精子與卵子受精識別的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)
? 抗原表位研究
(5)蛋白——核酸
? CRISPR-Cpf1 識別剪切 RNA 的分子機制
? 核酸適配體檢測霉菌毒素
(6)蛋白——脂類
? 新冠病毒 S 蛋白結(jié)合膽固醇
? 調(diào)控蛋白與磷脂酰肌醇二磷酸識別機制
(7)蛋白——復(fù)合物
? 蛋白酶體與去泛素化酶動態(tài)調(diào)控機制
(8)蛋白——納米顆粒
? 靶向乳酸代謝的工程仿生納米顆粒治療膠質(zhì)瘤
? 多肽修飾的納米顆粒抑制病毒侵染
? 核酸適配體修飾的納米顆粒探針
(9)蛋白——糖類
? 流感病毒結(jié)構(gòu)改變介導(dǎo)病毒在人類傳播的機制
(10)免純化 / 無標(biāo)記檢測
? 老藥新用,Wnt/β-catenin 信號通路活性抑制
? 血清中多克隆抗體 - 海洛因結(jié)合檢測
? 葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白抑制劑